ag尊龙凯时小鼠纤维肉瘤细胞MCA-205培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：MCA-205小鼠纤维肉瘤细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10% FBS
传代方法：首次推荐1:2传代
传代情况：每两天更换培养液
备注：使用无菌离心管收集培养基，进行过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接采购ag尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞接收及处理

收到细胞后，培养至良好状态，将完全培养液灌满并封好瓶口是运输细胞的最佳方法。用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，放入超净工作台内进行严格操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行其它处理。显微镜观察细胞生长情况，对不同倍数进行拍照记录，特别前三天的照片为售后依据。如未提供照片，默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%融合度时，收集培养液至离心管中，保留5ml完全培养基继续放置于37℃、5% CO2孵箱培养；如细胞融合度超过80%，可进行传代培养。具体步骤如下：
1. 丢弃培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃下消化1-2分钟，显微镜下观察消化情况，若细胞变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS洗涤细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打，使细胞脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重新沉淀细胞并加入1ml的ag尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换新鲜完全培养基，持续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中易于脱落，这属于正常现象。请将培养瓶内所有培养液收集至离心管，进行1000RPM离心，并收集上清进行过渡培养。沉淀加入胰蛋白酶1-2ml轻轻重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心并重悬，按1:2比例进行分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

ag尊龙凯时对细胞出现问题的重发情况如下：
1）细胞运输途中遇到的损失、污染等问题可重发，需在收到后48小时内反馈结果；
2）细胞活性不足需在7天内提供实验数据和照片进行核实，如符合条件可重发；
3）未在收到细胞的当天以及第2、3天拍照者，视为产品合格。